Tris-Tricine-PAGE蛋白電泳試劑盒（含預制膠）

Tris-Tricine-PAGE Protein Electrophorosis Kit Contaning Precast Gels

● 貨品內容：

● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Tris-Tricine-PAGE電泳試劑盒含有RealPAGE Tricine蛋白預制膠，可以用來(lái)檢測1-40 kD的多肽大小。試劑盒里含有電泳緩沖液、上樣緩沖液和蛋白染色液，方便使用。

預制膠玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝膠尺寸8.3×7.5 cm，凝膠厚度1.1 mm，梳子12齒，最大上樣體積30 μl，兼容伯樂(lè )電泳槽。

該產(chǎn)品配套膠板和緩沖液可以進(jìn)行10次電泳。

● 貯存、運輸和效期：

按照標簽溫度貯存；常溫運輸；有效期1個(gè)月。

● 使用說(shuō)明：

一. 電泳緩沖液配制：

10×Tris-Tricine -SDS緩沖液配制：

將10×Tris-Tricine -SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat：CB010P）置于一干凈的燒杯中，加入500ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調節pH，即配成500ml 10×TTS緩沖液。用前稀釋10倍配成1×TTS緩沖液。

注：伯樂(lè )Mini III電泳槽一次電泳使用300-350 ml 1×TTS緩沖液。

二. 樣品處理：

      待上樣的檢測樣品與2×Tricine多肽上樣緩沖液[Cat：TP050]等體積混合，95℃處理5分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液，根據說(shuō)明書(shū)上樣（預染Marker不能加熱處理，非預染Marker上樣前一般要95℃處理5分鐘）。

 三. 電泳：

3.1 拆開(kāi)預制膠包裝，將預制膠安裝在合適的電泳槽中。

注：伯樂(lè )Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（右圖）。

六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等電泳槽可以直接使用預制膠。

不兼容Thermol系列電泳槽。

3.2 將電泳槽的內槽加滿(mǎn)1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器將梳孔吹洗干凈，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過(guò)處理）加入點(diǎn)樣孔，穩壓電泳（表1），至藍色指示前沿至分離膠下沿位置時(shí)即可停止電泳。

表1 多肽電泳條件

四.染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202）

4.1 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量染色液（以剛剛覆蓋過(guò)膠面為適），蛋白條帶含量高于1μg的，染色1-2分鐘即可見(jiàn)。

4.2 搖床上常溫搖動(dòng)10-15分鐘，至條帶清晰可見(jiàn)滿(mǎn)足實(shí)驗要求后停止染色。

4.3 蒸餾水漂洗凝膠，在蒸餾水中脫色搖動(dòng)10-15分鐘，至凝膠基本無(wú)藍色背景，拍照記錄結果。

五. 轉膜：

多肽轉膜選擇孔徑0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇處理潤濕）或0.22 μm NC膜。

5.1 半干轉：

使用伯樂(lè )Trans-Blot Turbo半干轉機器請選擇配套的5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液（貨號：RT5030）。轉膜推薦條件：一板小型凝膠（8×10 cm）恒流，1.3 A，7-10 min。

5.2 濕轉：

濕轉轉膜緩沖液：25 mM Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3。