ECL發(fā)光Marker
II(22-154 kD)
●產(chǎn)品編號及規格:
RTD6129 20T(100μl)
● 儲存條件:
-20℃保存,開(kāi)封后有效期12個(gè)月
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
ECL發(fā)光Marker是一種新型可視的 Western Blot(蛋白免疫印跡法)蛋白標準,可在同一膜上實(shí)現與目的蛋白同時(shí)顯示,而無(wú)需任何附加步驟和額外的試劑。該產(chǎn)品由8 種高純度的重組蛋白和2 種預染重組蛋白組成,指示的蛋白質(zhì)分子量大小為12-154 kD(~12、22、28、38、50、62、~70、78、113、154
kD),其中~70 kD 為橙紅色預染條帶,~12 kD 為藍色預染條帶,方便動(dòng)態(tài)觀(guān)察蛋白質(zhì)電泳狀態(tài)或判斷蛋白質(zhì)轉膜效果。22、28、38、50、62、78、113、154
kD 等8 種重組蛋白可以結合幾乎所有類(lèi)型抗體,可與目的蛋白質(zhì)同時(shí)結合抗體并經(jīng)ECL顯色。該產(chǎn)品為即用型,冰浴融解后即可使用。
● 使用說(shuō)明:
1.ECL發(fā)光Marker徹底溶解后,混勻上樣(3-5 μl);
注a:對于使用一抗為鼠源抗體建議取本產(chǎn)品5 μl進(jìn)行蛋白電泳;對于使用一抗為兔源抗體可以降低上樣量至3 μl;建議初次使用本產(chǎn)品時(shí)可以根據自身的實(shí)驗條件和實(shí)驗習慣通過(guò)預實(shí)驗確定合適的上樣量,以獲得效果更佳的實(shí)驗圖片;
注b:Marker為即用型,不能100℃加熱處理,否則會(huì )導致蛋白條帶發(fā)生降解或失去效果
2.待測蛋白樣品上樣;
3.常規聚丙烯酰胺凝膠電泳;
4.參照具體儀器說(shuō)明,將蛋白轉移至合適的膜上;
5.參照目的蛋白抗體說(shuō)明書(shū),進(jìn)行膜封閉、一抗孵育、二抗孵育及相應的膜洗滌;
6.化學(xué)發(fā)光檢測,具體方法參照相關(guān)產(chǎn)品說(shuō)明。
● 問(wèn)題及解決:
ECL發(fā)光 Marker 的使用規范及其使用范圍請詳細閱讀上文,下表列出了實(shí)驗中可能出現的問(wèn)題及相應的解決方法,敬請參考:
問(wèn)題
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原因
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解決方法
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條帶弱或者沒(méi)有條帶
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上樣量偏少
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加大上樣量
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轉膜不充分
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參照儀器使用說(shuō)明書(shū),優(yōu)化轉膜條件,或使用蛋白預染 Maker判斷轉膜效果
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檢測系統所用試劑失效
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確認使用的檢測試劑正常工作,優(yōu)化一抗、二抗及檢測底物的反應條件(濃度、溫度、時(shí)間)
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抗體沒(méi)有有效結合 ECL發(fā)光 Marker
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不同來(lái)源的抗體及其亞型與 ECL發(fā)光 Marker的結合效果差異明顯,請根據實(shí)驗具體情況加以選擇
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條帶過(guò)亮呈彌散狀,甚至無(wú)法區分條帶
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ECL發(fā)光 Marker上樣量偏多
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減少上樣量
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抗體濃度過(guò)高
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降低一抗、二抗使用濃度,優(yōu)化抗體反應條件
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