10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（濕轉，粉末型）
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產(chǎn)品編號
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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規格
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TA5030P
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（濕轉，粉末型）
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500 ml
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● 簡(jiǎn)介：
10×Tris-醋酸轉膜緩沖液是專(zhuān)門(mén)用于Tris-醋酸系統分離高分子量蛋白后轉膜的緩沖液。建議用于Western時(shí)濕轉轉膜，為方便客戶(hù)使用，10×轉膜緩沖液中沒(méi)有添加甲醇和SDS，客戶(hù)根據需要配制1×轉膜緩沖液時(shí)自行添加。
● 保存、運輸和貯存：
常溫保存，有效期兩年。
配成溶液后建議4℃保存，有效期6個(gè)月。
1×即用型轉膜緩沖液建議現用現配，不建議保存。
● 轉膜緩沖液配制：
1. 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型）配制：
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原料
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型）500 ml
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（濕轉，粉末型）
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取TA5030P全部粉末溶于500 ml超純水中，即配制成500 ml 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液（溶液型）
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2. 1×即用型Tris-醋酸轉膜緩沖液配制：
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1×即用型轉膜緩沖液 配制量 1升
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)
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100
ml
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變性蛋白
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非變性蛋白
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＜20 kD蛋白
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無(wú)水甲醇
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20%
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5-10%
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SDS
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0.01%
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0.01%
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20-80 kD蛋白
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無(wú)水甲醇
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10%
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0-5%
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SDS
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0.05%
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0.05%
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＞80 kD蛋白
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無(wú)水甲醇
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10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
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0%
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SDS
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0.1%
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0.1%
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超純水
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定容至1升，不要調節pH，pH~7.2
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注：甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加結合在膜上，而SDS讓蛋白更加離開(kāi)膜。因此對大蛋白轉膜來(lái)說(shuō)，多加SDS，少加甲醇；而對小蛋白轉膜，多加甲醇，少加SDS。
● 轉膜：
1. 膜的選擇：轉膜可以選擇PVDF膜或NC膜。根據蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說(shuō)來(lái)，大于20 kD蛋白選擇0.45
μm孔徑，低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無(wú)水甲醇潤濕活化。
蛋白轉膜三明治制作：
負極（電轉夾黑色面）-海綿墊-1層1
mm厚度濾紙-凝膠-膜-1層1
mm厚度濾紙-海綿墊-正極（電轉夾白色面）
3. 轉膜條件：
以下轉膜條件僅供參考，客戶(hù)針對自己的目的蛋白，最好經(jīng)過(guò)1-2次預實(shí)驗后，確定最佳的轉膜條件。
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膜孔徑
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蛋白大小
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穩流
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建議時(shí)間
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降溫措施
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0.22 μm
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低于20 kD
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200 mA
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~30分鐘
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分鐘
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分鐘
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需要
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0.45 μm
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高于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小時(shí)
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需要
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